· pólýakrýlamíðGel verður að vera blanda af akrýlamíðmónómer, upphafsefni fjölliðunar, hvata og réttu salti og stuðpúðablöndu saman.
· akrýlamíðog BIS (N,N'-metýlen tvöfalt akrýlamíð) er einliðaform gelgrunnefni.
· Upphafsferill fyrir fjölliðun líms með ammoníumpersúlfati. Til að búa til límið þarf 10% ammoníumpersúlfatlausn útbúin í vatni. Flestar upplýsingar benda til þess að límið þurfi að nota það á virkan hátt. Hins vegar er hægt að geyma 10% lausnina við 4°C í nokkrar vikur án þess að virknin minnki verulega. Fyllið upp að 10 ml og fargið þegar límið hættir að þjappa saman.
Ábending: Hlutfallið afakrýlamíðÍ raðgreiningu er lím og próteinlím ekki það sama. Ef þú notar tilbúna akrýlamíð: BIS lausn skaltu ganga úr skugga um að þú fáir réttu flöskuna.
· TEMED (N, N, N', N'-tetrametýl etýlendíamín) er hvati í brúnum flöskum sem eru settar í kæli. Bætið við rétt áður en límið er hellt út í.
· Gler sem notað er við rafdrátt með pólýakrýlamíð ætti að þvo fyrir og eftir hverja rafdrátt. Eftir rafdrátt skal þvo með mjúkum bursta og klút í heitu sápuvatni, skola með eimuðu vatni og láta þorna.
· Raki og ryk geta valdið skemmdum á holum fjölliðum. Fyrir rafgreiningu skal þrífa glerplötuna með glerhreinsiefni og þurrka hana með mjúkum bursta. Þvoið með eimuðu vatni og þerrið vandlega með pappírsklút. Skolun með 70% etanóli áður en þurrkað er með pappír hjálpar til við að þrífa og flýta fyrir þurrkun. Bætið sýnum af akrýlamíði út í röð: BIS, vatni, stuðpúðalausn, ammóníumpersúlfati, TEMED. Hristið vel og hellið strax.
Það er ekki nauðsynlegt að afgasa pólýakrýlamíð fyrir fjölliðun. (Akrýlamíð var áður sett í lofttæmi til að fjarlægja loftbólur því súrefni hindrar fjölliðun.)
Sýnishorn af láréttum límpunktum.
· Setjið svartan pappírsstykki í neðri kassann, með svörtum bakgrunni til að búa til gat fyrir sýnishornið svo það sjáist betur.
· Límtankur fylltur með stuðpúða, rétt fyrir ofan kolloidið.
· Ef ljós er á brúninni, kveikið þá á ljósunum og látið ljósið skína. Dragið sýnið upp í pípettuna.
· með því að nota sjálfvirkt pípettunartæki.
· Í 10-200 µ1 vökvahreyfipunkti er hægt að nota hann á flestum stöðum á sýninu. Fyrir mjög lítil sýnisgöt (minni en 10μ1) er þægilegra að nota langan pípettuhaus sem notaður er til raðgreiningarlíms.
· Pípettering er einfaldlega sökkt í sýnið og öndun á hægfara vökva er notuð. Sýnið getur virst klístrað af glýseríni og hröð dæling getur dregið loftbólur inn í pípettuhausinn.
· Eftir að sýnið hefur andað að sér pípettuhausinn, skal vökvahausinn hreyfast varlega meðfram brún pípunnar eða þurrka af pappír til að sjúga vökvahausinn út fyrir dropana. Gætið þess að sjúga ekki sýnið.
Setjið sýnið í sýnisopið
· Pípettunarbúnaður til að viðhalda smá þrýstingi, láta sýnin hreyfast örlítið við yfirfallsvökvahausinn.
· Pípettuhausinn er settur í stuðpúðann, örlítið hærra en punktgötin, til að viðhalda jákvæðum þrýstingi. Hægt er að stinga oddi pípettunnar í lítið gat.
· Dragið sýnin hægt og rólega út. Pípettuoddurinn er settur fyrir ofan sýnisopið og sýnið mun sökkva ofan í gatið. Látið sýnið sökkva til að fylla sýnisopið í stað þess að ýta því inn.
· Þegar síðasti dropinn af sýninu með vökvahausnum er kominn, færist vökvinn yfir á seinni fótinn, lyftir vökvanum hægt og rólega upp og færist út úr stuðpúðanum.
Hvernig á að taka lóðrétta límsýnatöku?
· Lóðrétt límpunktssýnishornsgöt mynduð á milli tveggja glerhluta. Í mjög þunnu lími er ekki einu sinni hægt að setja pípettuhausinn á milli tveggja glerplatna. Gætið að glýseríninu! Setjið pípettuhausinn yfir sýnisgatið og sýnið mun sökkva ofan í gatið.
· Áður en sýnið er tekið skal gæta þess að skola lóðrétta oddinn á pólýprópýlen asýlgel sýnisopinu hreint. Þvoið burt ópolymerað akrýlamíð og vatn sem kann að birtast neðst í sýnisopinu. Vatnið getur minnkað sýnisopið verulega. Notið 25 ml eða 50 ml sprautu og 18 gauge nál. Hellið rafgreiningarlausninni í og skolið sýnisopið vandlega.
· Það getur verið erfitt að sjá sýnisopið, en samt sem áður er restin auðveld. Ef umfram göt eru er hægt að prófa sýnislausnina með brómófenólbláu.
Birtingartími: 31. mars 2023